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吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双荧光染色试剂盒详细介绍

产品简介:
    细胞凋亡的检测方法有形态学研究方法,生物化学研究方法,DNA片段化检测方法,以及TUNEL等标记片段化DNA方法,但从细胞凋亡概念产生的历史及准确性方面考虑,使用光学显微镜及电子显微镜进行的形态学观察是很重要的。
    细胞死亡的检测方法有用荧光色素染色分活细胞、死细胞,测定细胞代谢活性和形态学观察。这些方法都是利用细胞凋亡这种情况进行测定的,因而不一定反应实际情况。MTT法是测定线粒体中特有酶的活性,反映细胞数目的变化,其结果与细胞死亡的数目未必一致。所以,有必要采取多种方法判断细胞死亡。
    吖啶橙嵌合到双链DNA分子中显绿色,与DNA单链或RNA结合时发橙色荧光。EB嵌合到DNA碱基对中间时发红色荧光。吖啶橙可透过或细胞膜,EB不能通过与活细胞膜具有相同通透性的细胞膜。     操作步骤(仅供参考):
1.每份样品中加入试剂(A)及试剂(B)各1ui,混合均匀;
2.500g离心细胞5min;
3.用PBS重悬细胞,将细胞密度调整为5X105 ~5X106/ml
4.每25ul细胞悬液中加入试剂(A)和试剂(B)混合液;
5..在洁净的载玻片上加上5ul细胞悬液,盖上盖玻片,在荧光显微镜B域进行观察;
显绿色荧光的为活细胞,显橙色荧光的为死细胞。

注意事项:
1.用能通过活细胞与DNA结合后发蓝色荧光的Hoechist 33342和只能通过死细胞与DNA结合后发红色荧光的碘化吡啶(propidium iodide,PI)对细胞进行二重染色的方法也比较常用。
2.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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